ПЦР-диагностика ВИЧ-инфекции у детей, родившихся от ВИЧ- инфицированных матерей

Сентябрь 01, 2015 By: admin Category: Разное

Диагностика ВИЧ-инфекции у детей первых месяцев жизни играет первостепенную роль в дальнейшей судьбе ребенка и дает возможность решить такие задачи, как назначение специфической терапии, адекватная вакцинопрофилактика, грамотная диспансеризация, оптимизация сроков наблюдения, своевременная социальная адаптация. Но, несмотря на успехи, достигнутые в области диагностики ВИЧ-инфекции, установление окончательного диагноза у таких детей, рожденных ВИЧ-позитивными матерями, и в настоящее время предствляет собой серьезную задачу.

Известно, например, что присутствие материнских антител (АТ) к ВИЧ в плазме/сыворотке крови детей, родившихся от ВИЧ-инфицированных матерей, затрудняет использование стандартных серологических тестов в диагностических целях. АТ к ВИЧ при тестировании методом ИФА обычно исчезают к 9-12 мес, хотя в отдельных случаях (по данным разных авторов, до 2%) они могут обнаруживаться вплоть до 18 мес жизни ребенка. В связи с этим были предложены новые критерии постановки диагноза ВИЧ-инфекции у детей в возрасте до 18 мес с использованием прямых методов диагностики, среди которых метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) является наиболее чувствительным, специфичным, и при этом недорогим по сравнению с вирусологическим методом (выделение вируса в культуре). Показано, что ПЦР на ДНК позволяет выявить до 50% в течение первого месяца и 100% истинной ВИЧ-инфекции к 3-6-му месяцу жизни у детей, рожденных от ВИЧ-серопозитивных матерей.

Нами для диагностики ВИЧ-инфекции у детей, рожденных от ВИЧ-позитивных матерей, использовалась коммерческая тест-система фирмы «Roche» — «Ampli- cor HIV-1 test», которая имеет лицензию, разрешающую ее применение на территории России. В состав тест-системы входят три независимых набора:

— набор для выделения провирусной ДНК ВИЧ-1 из мононуклеарных клеток периферической крови;

— набор для амплификации (или ПЦР), с помощью которой осуществляется многократное копирование фланкированного праймерами фрагмента провирусной ДНК ВИЧ-1;

— набор для гибридизационно-ферментной детекции (в результате гибридизации происходит прикрепление амплифицированных фрагментов (или амплико- нов) к поверхности микроПланшетов, сенсибилизированных специфическими олигонуклеарными зондами, а ферментативное расщепление субстрата приводит к развитию окраски, интенсивность которой измеряется колориметрически).

Высокая степень стандартизации теста позволила достичь наилучших на сегодняшний день показателей чувствительности и специфичности (100% и 99,8%, соответственно). Здесь важно отметить, что для тест- систем такого типа введено понятие аналитической чувствительности, в дополнение к чувствительности диагностической (под аналитической чувствительностью понимают минимальное количество копий ДНК/ РНК, которое может быть определено с помощью используемой тест-системы; для использованной нами тест-системы этот показатель максимально приближен к теоретически возможному: 1-10 копий).

С помощью системы «Amplicor HIV-1 test» нами произведена диагностика ВИЧ-инфекции у 174 детей из различных регионов России.

Схема обследования детей предусматривала по возможности первичное тестирование в возрасте 1 мес, и при получении отрицательного результата повторное тестирование в возрасте 6 мес. Получение положительного результата подтверждалось повторным тестированием независимой пробы, взятой в максимально короткий срок.

Всего за период с февраля 1998 г. по апрель 2001 г. нами проведено 242 исследования.

Comments are closed.



Категории:


Дошкольное образование